Фидер гамма: ЭНЕРГОСБЫТХОЛДИНГ. 404. Страница не существует

Консультации по фидерной ловле (выбор снасти, монтажи, и т.д.)

Доброго времени суток дорогие коллеги по болезни. Несомненно фидер в нашей стране становится всё более популярным и уже многие им заболели, а скольким ещё предстоит заболеть! Новая ипостась в рыбной ловле несёт в себе много загадок и секретов. Я хотел бы приоткрыть занавес тайны, поделиться своим опытом и передать его вам, дорогие любители английской донки здесь и сейчас, что бы этот вид ловли становился всё более и более популярным! Купи фидер – выкинь сеть!

Консультации по рыбной ловлеКонсультации от гуру спиннингаКонсультации по спиннинговой ловлеКонсультации по спиннингам SLrodsКонсультации по фидерной и поплавочной ловлеКонсультации по приложению и смарт сенсору CyberfishingКонсультации по спиннинговой ловле белых хищников, продукции бренда Nautilus и SV fishing luresКонсультации по джерковой ловлеКонсультации по спиннинговой ловле и зимней ловле на мормышкуВопросы консультантам магазинаВопросы по заказам и оплатеВопросы администратору порталаВопросы программистамКонсультации по продукции LuckyCraft и многое другоеКонсультации по спиннингам, катушкам и приманкам AIKOКонсультации по приманкам ТМ SPRUTКонсультации по спиннингам Black Hole и приманкам ItumoВопросы по товарам от SMITH и ByronКонсультация по брендам AKARA, SURF MASTER, крючкам MARUTOКонсультации по фидерной ловле, летнему кивку и снастям производства “Левша-НН”Консультации по донной ловле и карпфишигуКонсультации по брендам RYOBI, KUTOMI, FREEWAYКонсультации экспертов компании QUICK STREAMКонсультации по тактике и технике спиннинговой ловлиКонсультант по эхолотам DEEPERКонсультации по спиннингам Graphiteleader, MajorCraft, Talon и многое другоеКонсультации по картографии NavionicsКонсультации по современной спиннинговой ловле и зимней ловле на блеснуКонсультации по спиннингам Nordic StageКонсультации по спиннингам Norstream и воблерам JackallКонсультации по торговым маркам DAIWA, ALLVEGA , GAMAKATSU, DIXXONКонсультации по спиннингам CD rods и Hearty RiseКонсультации по катерам Spinningline Boats (SL-470)Консультации по спиннингам FavoriteКонсультации по продукции LOWRANCE

SL2G-3X3/3A Предохранитель- выключатель-разъединитель (фидер) габ.

2 400А с гамма контактом (L203110400THL)

Реечные предохранители – выключатели – разъединители, применяются главным образом в распределительных устройствах низкого напряжения согласно МЭК 60439-1. Соответствуют МЭК 60947-3-99, поставляются с габаритами от 00 до 4а, с однополюсной или трёхполюсной коммутацией

• Кабельные отводы сверху/снизу по выбору
• Клемма прямого подключения
• В двойном исполнении до 2000А
• Компактные аппараты 910А для питания
трансформатора до 630 кВА
• Многофункциональная крышка
• Модульная конструкция
• Высокая коммутационная способность
• Малые потери мощности
• Применимы стандартные гарнитуры
заземления

Определение
LV HRC Реечные предохранители- выключатели- разъединители это трёхполюсные аппараты вертикальной конструкции, исполненные в форме рейки предназначенные для установки на систему сборных шин. Три однополюсных предохранителя- выключателя- разъединителя, расположенных друг над другом, объединены в один блок. По одному из двух контактов каждого полюса (питающий контакт) соединены с одной из фаз трёхфазной системы сборных шин, другой контакт каждого полюса (отводящий контакт) снабжён кабельными зажимами для отходящих кабелей.
Применение
Универсальные реечные предохранители- выключатели – разъединители отвечают всем требованиям, возникающим при распределении энергии у энергораспределительных компаний и промышленности при применении в распределительных устройствах низкого напряжения, в сетевых и трансформаторных станциях, а также в распределительных шкафах. Типовая серия поставляется для следующих токов: 160А, 250А, 400А, 630А, габарит 3/910А, габарит3/1000А с коротко замыкающими соединителями, габарит 3/1250А в сдвоенном исполнении с коротко замыкающими соединителями, габарит 3/1600А в сдвоенном исполнении с коротко замыкающими соединителями, габарит 3/2000А в сдвоенном исполнении с коротко замыкающими mсоединителями. Так же в программе имеются аппараты габарита 4а до 1250А.

Принцип работы
Предохранители- выключатели – разъединители предназначены для установки в них LV HRC предохранительных вставок и, тем самым, для коммутации и защиты электрических цепей от коротких замыканий и перегрузок. Разъединители коммутируются пофазно и под нагрузкой. Универсальные откидные устройства всегда позволяют использовать измерительные приборы для снятия параметров тока при использовании измерительных предохранителей, а так же адаптеры параллельного вывода для организации экстренного отбора тока. Присоединение отводящих кабелей осуществляется на выбор сверху или снизу.

Конструкция
Неразъёмный корпус, в котором находятся токоведущие части, изготовлен из высокопрочного, армированного стекловолокном, полиэфира. Посеребрённые контактные группы для предохранительных вставок и оцинкованные отводящие шины гарантируют малые потери мощности, оптимальный температурный режим и высокую коммутационную способность. Отводящие шины, направленные вниз, в стандартном исполнении рассчитаны на применение болтового соединения для присоединения отводных кабелей, но могут применяться так же и клеммы прямого подключения. Для габаритов 1-3, после демонтажа верхней части разъединителя, такие токопроводящие части, как контакты и отводящие шины, остаются защищёнными от опасного прикосновения потому, что на основании остаются крышки контактов со встроенной дугогасительной камерой. Верхняя часть разъединителя с откидным устройством благодаря использованию поворотных фиксаторов может быть быстро и просто смонтирована и демонтирована на его основании..

 

strong

Лещ на фидер под бровкой. Зимний фидер

Этот выезд на Москва реку для ловли фидером я ждал около 3-х дней. Дело в том, что морозы, которые обрушились на Москву в эти дни, сковали даже видавшую виды реку, протекающую через Москву и несущую в себе теплые сточные воды. Но, как оказалось, перед такими температурами не смогла устоять и наша любимая московскими спортсменами река. Собирая новости из разных источников, я, уже поздно вечером, узнал, что река в разных районах покрылась льдом: где-то полностью, но в основном — это закраины от берега до уреза открытой воды в 10-15 метров и лишь только единичные участки с закраинами по 4м, что давало шанс на ловлю, но с огромным трудом. Новости не самые хорошие. Хорошо, что узнал это заранее, а не на водоеме, как и попадали многие мои товарищи по увлечению фидерной рыбалкой в зимний период.

Мониторя условия на протяжении 3-х дней я узнал, что лед ушел с русловой части реки, но закраины еще местами есть. Рыбаки начали пробивать закраины топорами, чтобы пробиться к реке для комфортной ловли. Н-да, видно не я один так сильно хотел половить москворецких лещей нашей любимой донной удочкой. Уловы по слухам в интернете не очень хорошие и даже редко превышали 3-5кг. Видно, сказалось резкое изменение погоды, так как на день моего выезда погода была уже -4, в отличие от предыдущих дней -25-27.

И, тем не менее, рвение рыболова к реке остановить очень трудно.

Я думаю вы прекрасно меня понимаете?!
Сон перед рыбалкой как всегда короткий и неспокойный! Вопрос, который не давал спать — это нерешенная проблема с реализацией крупной рыбы, которая после подсечки оказывалась в бровке, точнее кормушка застревала и при ее подергивании средняя рыба проходила такое испытание, а все бонусы в виде лещей, оставались за бровкой высотой около 4м и с практически отвесной вершиной подъема.

Так как цель выезда была поймать улов, который выходил бы за рамки 10кг (от 9970г до 10220г), которые меня преследовали на протяжении 5-и последних рыбалок, сливать бонусных рыб я не хотел.

Да и на крайнем выезде, собирая вещи, как это часто бывает, произошла поклевка бонусного леща, по сопротивлению рыбы было ясно — это лещ около 2-х кг, но бровка решила исход борьбы в пользу рыбы.

Решая такой вопрос, я сразу отмел кормушки из метала, так как их плавучие способности на выматывание оснастки просто несравнимы с кормушками из пластика. Пластиковые кормушки легки на подъем и дадут мне больше шансов на успешное вываживание.

Шаг второй — это фидер с более солидной ростовкой. Так как я ценитель тонкой ловли, не хотелось брать 4.2м и ловить кормушками 56г. «Стрельба из пушки по воробьям» — не совсем спортивный подход к рыбалке, поэтому перебирая свои удилища мой глаз пал на фидерное удилище Волжанка Pro-Sport 80г 3.9м c довольно жестким строем, что уже позволит мне достаточно быстро отрывать кормушку со дна.

Рост бланка 3.9м давал плюс при вываживании из-за бровки на поднятых руках. Это сработало! Я с легкостью вываживал средних и мелких по размеру рыб, не цепляя за бровку.

Но, что же делать с трофейными экземплярами, которых не так много, чтобы их можно было упускать, оставляя за бровкой и которые наверняка послужат хорошим довеском для улучшения результата в предстоящий выезд? Визуализируя несложную картину в своем воображении, мне вырисовывалась следующая картинка, как моя кормушка воткнулась в бровку, а на поводке лещ. Что в такой ситуации происходит?! Кормушка зафиксирована в бровке, лещ на поводке предоставлен сам себе — может от крючка избавляться или обрывать поводок.

Эксперименты с ослаблением лески, в надежде что лещ вытащит кормушку, не увенчались успехом и не давали уверенности в точном вываживании.

В попытках продернуть кормушку слабыми рывками, она выходила из бровки, но, как правило, такие рывки просто напросто не мог выдержать поводок или просто выскакивал крючок из пасти рыбы.

Увеличение диаметра поводка?! Исключало в уловах трофейных лещей.
Что же могло «занять» леща на поводке, пока я вынимаю кормушку из бровки?
Да…! Точно! Это же элементарно! Резинка в оснастке!
Пока моя кормушка проталкивается через бровку застревая, резинка будет удерживать рыбу на поводке, не давая ей освободиться от крючка.
И, конечно же, резинка выполнит свой основной функционал — будет смягчать рывки рыбы и рывки, которые я создаю бланком своего фидерного удилища, дабы освободить кормушку из-за бровки.
Казалось, решение найдено, но вопросы еще оставались. Какая резинка нужна? Фидер гам? Штекерная резина? С такими вопросами провалился в сон, казалось, что будильник прозвенел моментально.

Как же легко вставать на рыбалку даже после короткого сна… на работу как-то… не так!
Чашка горячего кофе пробудила мой мозг и я вспомнил, что у меня есть еще один вид амортизатора для оснастки — это бисерная резина…

Быстро сделав три амортизирующие вставки (кусок — резинка, с двух сторон петли) из разных резинок и закинув их в свой рыболовный ящик (платформу), я отправился на водоем, предвкушая интересную рыбалку.

На водоеме переодически меняя разные виды амортизаторов, а такими были: фидер гам от компании Drennan 6 Lb, резина штекерная диаметром 0.06мм и бисерная резинка «Гамма» диаметром 0.06мм, я смог проанализировать и подобрать именно тот амортизатор, который подошел больше под мои условия ловли и данную ситуацию.

Результаты таковы, что фидер гам оказался жестковат, как я и предполагал, так как вес рыбы, которая в основной массе ловилась весь день, это экземпляры около 400г. Штекерная резинка в данном диаметре 0.06мм была излишне эластичной, что при проходе через бровку приводило к травмированию резинки и в дальнейшем обрыву самой резины на рыбе.

Идеальным соотношением и диаметра, и растяжимости оказалась бисерная резинка, которая работала на рыбе просто изумительно. Бисерная резинка всегда находилась в растянутом состоянии на вываживании, в процентном соотношении это примерно 50%. То есть из 10см резинки получалось 15см, что позволяло вполне нормально управлять вываживанием рыб разных видов, не взирая на их буйный характер, что не скажешь о штекерной резине, которая увеличивалась в 3-5 раз и рыба могла делать все, что ей угодно, увеличивая время вываживания.
Бисерная резинка работала весь оставшийся рыболовный день и претензий к ней не было… А когда произошла поклевка долгожданного бонусного леща и кормушка попала в бровку, я протаскивал кормушку уже с полной уверенностью, что бисерная резинка не отпустит моего леща, пока я побеждаю бровку.

Благодаря именно бисерной резине, а точнее именно тому соотношению растяжимости, которое мне подошло для этих условий, я смог улучшить свой результат по зимнему фидеру, именно перетащив через бровку своего бонусного леща на 1350г и смог поймать общий улов весом 11760г, чему был несказанно рад.
Чего и вам желаю!

Автор Пузанов Сергей.

Facebook

Вконтакте

Расширение гамма-дельта Т-клеток

Экспансия гамма-дельта-Т-клеток – краткий обзор методов на основе бисфосфоната и K562

Ви Киат Тан 1 , Йохан С.К. Тай 2 , Цзиминг Цзэн 3 , Мин Чжэн 4 , Шу Ван 2,3*

1 Tessa Therapeutics, Pte Ltd. , Сингапур 239351

2 Факультет биологических наук, Национальный университет Сингапура, Сингапур 117543

3 Институт биоинженерии и нанотехнологий, Сингапур 138669

4 Отделение дерматологии, Вторая дочерняя больница, Чжэцзянский университет, Медицинский факультет, Китай 310009


Гамма-дельта (γδ)-Т-клетки представляют собой лимфоциты, происходящие из тимуса, которые отличаются от αβ-Т-клеток своим анатомическим распределением и механизмами активации и функции.Их можно найти в виде резидентных лимфоцитов в тканях человека или в виде циркулирующих лимфоцитов в периферической крови 1 (Vantourout & Hayday, 2013). В отличие от αβ-T-клеток, которые функционируют исключительно в рамках адаптивного иммунитета, γδ-T-клетки являются врожденными иммунными клетками, которые распознают злокачественные клетки через свой репертуар активирующих рецепторов независимым от MHC образом, что похоже на естественные клетки-киллеры 2 ( Уэлш и др. , 1997).

Растущий интерес к использованию γδ-T-клеток в качестве альтернативной формы иммунотерапии частично вызван механизмом рестрикции MHC, который ограничивает иммунотерапию рака на основе αβ-T-клеток аутологичными условиями.γδ-T-клетки распознают антигены независимо от молекул MHC, и этот способ действия позволяет избежать GvHD при использовании в аллогенных условиях 3,4 (Deniger et al., 2014; Xiao et al., 2018). Сообщалось, что благодаря своему репертуару активирующих рецепторов γδ-T-клетки убивают in vitro широкий спектр линий раковых клеток, таких как лейкемия, меланома, лимфомы и другие карциномы 5 (Yoshikawa et al., 2014). Черпая вдохновение из растущей области химерных антигенных рецепторов (CAR), мРНК CAR-привитые αβ-T и γδ-T клетки были исследованы параллельно, и было обнаружено, что они проявляют сопоставимую цитолитическую активность против клеток меланомы.Однако γδ-T-клетки продуцировали меньше провоспалительных цитокинов по сравнению с αβ-T, что делает пациентов, которым вводили γδ-T-клетки, менее восприимчивыми к синдрому высвобождения цитокинов 6 (Harrer et al. , 2017). Учитывая вышеперечисленные качества, γδ Т-клетки можно производить в больших количествах в качестве готового агента для иммунотерапии рака.

γδ-T-клетки состоят из 2 основных подтипов, а именно подтипа TCR Vδ1 и подтипа TCR Vδ2. Оба подтипа могут быть обнаружены в периферической крови, но подтип Vδ1 преимущественно обнаруживается в эпителиальных тканях.Подтип Vδ1 сильно реагирует на связанные со стрессом факторы, обычно представленные на раковых клетках и инфицированных вирусом клетках, и разрушает эти клетки, тем самым формируя первую линию защиты в эпителиальных тканях 7 (Ebert, Meuter, & Moser, 2006). ). (Vantourout & Hayday, 2013) 1 Кроме того, было обнаружено, что Vδ1 γδ-T-клетки непосредственно убивают грамположительные бактерии, обнаруженные в кишечнике, и способствуют заживлению ран путем усиления пролиферации кератиноцитов на коже 8 (Nielsen, Witherden, и Хавран, 2017).

В периферической крови γδ-Т-клетки составляют лишь от 0,5 до 5% мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС), тогда как αβ-Т-клетки составляют примерно 50%. Среди этих циркулирующих γδ-T-клеток Vγ9Vδ2 T-клетки составляют большую часть подгруппы, хорошо изученной на предмет их противоопухолевой активности 9 (Davodeau et al., 1993), но составляют менее 10% всех T-клеток. 10 (Dopfer et al., 2014). Таким образом, нечастый характер γδ-T-клеток препятствовал их клиническому применению.Однако случайное открытие в 1990-х годах того, что биофосфонаты могут активировать пролиферацию Т-клеток Vγ9Vδ2 in vivo во время лечения резорбции кости, положило начало поиску дополнительных методов расширения. На этой основе были разработаны производные методы, такие как протоколы на основе цитокинов и фидерных клеток K562, для достижения клинически значимых показателей иммунотерапии рака. В этом обзоре мы рассматриваем современные методы культивирования γδ-T-клеток, которые удовлетворяют потребность в иммунотерапии рака на основе Vγ9Vδ2.

Подходы к размножению γδ-T-клеток на основе цитокинов до сих пор вращались вокруг комбинаторного использования как IL-2, так и золедроната (ZOL) или синтетического фосфоантигена бромгидринпирофосфата (BrHPP). ZOL и BrHPP имеют структурную гомологию с непептидными лигандами γδ-T-клеток, такими как промежуточное соединение изопентенилпирофосфат (IPP), обнаруженное в мевалонатном пути. Фермент фарнезилпирофосфатсинтаза (FPPS) в мевалонатном пути превращает IPP в фарнезилпирофосфат, и различные метаболиты, генерируемые этим путем, участвуют в росте и прогрессировании опухоли.Азотсодержащие бисфосфонаты (N-BP), такие как ZOL, ингибируют фермент FPPS посредством конкурентного ингибирования 11 (Kavanagh et al., 2006), и хотя это неясно, синтетические аналоги, такие как BrHPP, могут функционировать аналогичным образом.

Добавление ZOL или BrHPP к культуре РВМС блокирует активность FPPS и вызывает накопление IPP в моноцитах 12 (Roelofs et al., 2009) и клетках MHC Class II+ 13 (Soriano-Sarabia et al., 2012), который в совокупности активирует Т-клетки Vγ9Vδ2 посредством межклеточных взаимодействий.Хотя Т-клетки Vγ9Vδ2 могут функционировать как антигенпрезентирующие клетки (APC) по отношению к CD8+ цитотоксическим Т-лимфоцитам (CTL) 5 (Yoshikawa et al. , 2014), неясно, перекрестно ли они представляют IPP для взаимной активации. В более ранних публикациях Т-клетки Vγ9Vδ2 очищали от РВМС перед культивированием с ингибиторами FPPS и IL-2. Как описано Salot et al., меченые Т-клетки Vγ9Vδ2 отделяли от РВМС с помощью магнитных шариков; немеченую клеточную фракцию облучали и использовали для совместного культивирования с отсортированными Т-клетками Vγ9Vδ2 14 (Salot et al., 2009). Хотя гамма-облучение может уменьшить сопутствующую экспансию не-γδ Т-клеток, такое лечение также может нарушать способность профессиональных АПК к представлению антигена 15 (Merrick et al., 2005), что может объяснить низкие кратности экспансии Т-клеток Vγ9Vδ2 с использованием Этот метод.

Помимо APC, Т-клетки CD4 и секретируемые ими цитокины также способствуют активации Т-клеток Vγ9Vδ2. В модели Mycobacterium tuberculosis Т-клетки Vγ9Vδ2 были примированы цитокинами, секретируемыми Т-клетками CD4, такими как IFNγ и IL-2 16 (Pechhold, Wesch, Schondelmaier, & Kabelitz, 1994). Таким образом, удаление CD4+ и CD8+ Т-клеток могло способствовать снижению кратности экспансии Т-клеток Vγ9Vδ2 17 (Dokouhaki et al., 2010), хотя это могло быть частично устранено экзогенным IL-2.

В этих подходах, основанных на цитокинах, продолжительность культивирования часто поддерживалась в пределах 10–14 дней (таблица 1). Т-клетки Vγ9Vδ2, собранные с 12-го по 14-й день, могут быть наиболее оптимальными для терапии, поскольку цитотоксическая активность достигает пика на 12-й день и снижается к 14-му дню 18 (Kondo et al., 2008). Продолжительное воздействие фосфоантигенов на Т-клетки Vγ9Vδ2 в течение более 14 дней вызывало индуцированную активацией гибель клеток (AICD) 19 (Ferrarini et al., 2008). Следовательно, удлинение периода культивирования в погоне за увеличением размножения Т-клеток Vγ9Vδ2 сопряжено с риском получения истощенных Т-клеток Vγ9Vδ2 с более низкой цитотоксической активностью.

Хотя самая высокая скорость цитокиновой экспансии, описанная Kondo et al. составляет 13750 раз 20 (Kondo et al., 2011), все другие методы показали диапазон от 180 до 5000 раз (таблица 1).Следовательно, нечастый характер Т-клеток Vγ9Vδ2 требует большого начального количества РВМС для образования адекватных эффекторных Т-клеток Vγ9Vδ2 для АКТ. При средней терапевтической дозе 2×106 γδ-Т-клеток/кг массы тела 21 (Wilhelm et al., 2014) и средней массе тела человека 62 кг 22 (Walpole et al., 2012) типичная АКТ будет требуется не менее 1,2×108 клеток на инфузию. Это означает, что лейкаферез, который является инвазивной и напряженной процедурой для получения адекватных исходных РВМС, становится неизбежным и, следовательно, усложняет процесс генерации Т-клеток Vγ9Vδ2.Чтобы разработать готовую иммунотерапию рака, необходима большая скорость размножения Т-клеток Vγ9Vδ2, чтобы упростить процесс и снизить стоимость производства.

Таблица 1: Сравнение методов на основе бисфосфонатов и цитокинов для размножения γδ-Т-клеток

Используемые цитокины и реагенты Продолжительность (дни) Расширительная складка γδ-T Характер выполненной процедуры сортировки Артикул
IFNγ, IL-12, mAb против CD2, mAb против CD3 (OKT3), IL-2 14 Не определено; 70-кратное изменение общего количества клеток После первоначального расширения (Лю, Го, Герс, Нан и Лопес, 2005 г. ) 34
БрГЭС, Ил-2, ОКТ3 14 1585 ± 1493 (Салот и др., 2007) 35
ЗОЛ, Ил-2 14 4798 ± 654 (Кондо и др., 2008) 18
БрГЭС, Ил-2, ОКТ3 10 180 PBMC были отсортированы с помощью MACS «Набор для выделения TCR γ/δ + T-клеток» перед совместным культивированием с облученными остатками PBMC (Салот и др., 2009) 14
Ил-2, Ил-4, ОКТ3 от 10 до 14 376 ± 185 Истощение CD4 и CD8 Т-клеток с помощью набора для истощения RosetteSep перед культивированием (Докухаки и др., 2010) 17
ЗОЛ, Ил-2, Ил-18 14 1000-5000 НД (Ли и др., 2010) 36
ЗОЛ, Ил-2 от 10 до 14 13750 (Кондо и др. , 2011) 20
ЗОЛ, Ил-2, Ил-15 14 1000 (Ван Акер и др., 2016) 37

Различные отчеты, рассмотренные до сих пор, подчеркивают необходимость сохранения фракции Т-клеток, отличных от γδ, во время активации Zol и IL-2, а также необходимость учитывать продолжительность культивирования, чтобы клинически достаточное количество Т-клеток Vγ9Vδ2 могло получить для адоптивной клеточной терапии.

Чтобы создать еще большее количество эффекторных клеток, искусственные антигенпрезентирующие клетки (aAPC) были исследованы в качестве метода на основе фидерных клеток, чтобы обеспечить более устойчивый источник активации и костимуляции.K562 представляет собой MHC-негативную клеточную линию хронического эритролейкемии человека, которая была генетически модифицирована и адаптирована для клеточной экспансии поликлональных ЦТЛ 23 (Maus et al., 2002) и естественных клеток-киллеров 24 (Imai, Iwamoto, & Кампана, 2005). K562 изначально был выбран в качестве клеточного каркаса для генетической модификации, поскольку отсутствие экспрессии MHC класса I и класса II предотвращает аллогенные ответы от донорских Т-лимфоцитов 23 (Maus et al., 2002).

Deniger и его коллеги были первой группой, применившей эту технологию aAPC для размножения поликлональных γδ-T-клеток 3 (Deniger et al., 2014) (табл. 2). После использования микробусин для удаления NK-клеток и положительного отбора поликлональных γδ-T-клеток авторы использовали фидерные клетки K562, модифицированные для экспрессии CD19, CD64, CD86, CD137L и мембраносвязанного IL15, для увеличения и поддержания поликлональных γδ -T популяции. Эти клетки K562 были способны индуцировать экспансию в 4900 ± 1700 раз (таблица 2), что является явным улучшением показателей, полученных с помощью методов на основе цитокинов (таблица 1). В отличие от двух более поздних работ, посвященных подмножеству Vγ9Vδ2 25,4 (Cho et al., 2016; Xiao et al. , 2018), Денигер использовал эти фидерные клетки для расширения и изучения поликлональной популяции, а также изолированных подмножеств Vδ1 и Vδ2, и, что интересно, обнаружил, что ранее менее изученное подмножество Vδ1 способно также выявить противоопухолевые эффекты. . Кроме того, использование клеток K562 в качестве aAPC, по-видимому, сводит на нет эффекты AICD при длительном воздействии антигенов. В течение 35-дневного периода совместного культивирования Денигер сообщил о 107-кратном увеличении количества γδ-Т-клеток, полученных из пуповинной крови (UCB) 3 (Deniger et al., 2014). Авторы считают, что это приложение потенциально полезно, поскольку более молодые γδ-T-клетки, полученные из UCB, содержат более разнообразный репертуар TCRγδ и будут поддерживать более длительное приживление трансплантата у пациентов с аллогенными реципиентами.

Таблица 2: Сравнение методов размножения γδ-Т-клеток на основе K562

Используемые цитокины и реагенты Расширительная складка γδ-T Отношение совместного культивирования Т-клеток к фидерным клеткам Генетическая модификация фидерных клеток K562 Частота стимуляции фидерными клетками Тип выполненной сортировки Артикул
Ил-2, Ил-21 4900±1700 от 1 до 2 CD19, CD64, CD86, CD137L, мембраносвязанный IL-15 каждые 7 дней микрогранул CD56 для удаления NK-клеток; Набор для выделения TCRγ/δ+ Т-клеток для положительной селекции γδ-Т-клеток (Денигер и др. , 2014) 3
ИЛ-2, αCD3, αCD28 12-кратный на 14-й день, 1 000 000-кратный на 100-й день от 2 до 1 КД32, КД80, КД137Л каждые 7 дней Положительная селекция Т-клеток Vγ9Vδ2 на основе FACS перед совместным культивированием с aAPC (Чо и др., 2016) 25
ЗОЛ, Ил-2, ОКТ3 537340±607389 от 1 до 100 КД64, КД86, КД137Л один раз в день 7 Удаление αβ-Т-клеток с помощью магнитных шариков из культуры на 7-й день перед культивированием на стадии 2 с использованием аАРС K562 (Сяо и др., 2018) 4

Также работая с Т-клетками Vγ9Vδ2, Чо и его коллеги использовали другую клеточную линию K562, которая была модифицирована для экспрессии CD32, CD83 и CD137L вместо размножения Т-клеток Vγ9Vδ2, очищенных от РВМС с помощью сортировки FACS. В отличие от цифр расширения, достигнутых Deniger et al. , Cho и его коллеги смогли достичь примерно 12-кратного расширения к 14-му дню и 106-кратного к 100 25 дню (Cho et al., 2016). С точки зрения клинического применения это значительно увеличивает производственные затраты и продолжительность.

Опасения по поводу использования фидерных клеток K562 для размножения иммунных клеток связаны, прежде всего, с потенциальным присутствием остаточных клеток K562 после совместного культивирования и постинфузии пациентам. Чтобы решить эту проблему, клетки K562 подвергают гамма-облучению, чтобы остановить их клеточный рост и предотвратить непреднамеренную пролиферацию in vivo после ACT. В различных исследованиях, в том числе в нашем, сообщалось об очень низких или неопределяемых уровнях гамма-облученных фидерных клеток K562 после 7 дней совместного культивирования 26,4 (Lapteva et al., 2012; Сяо и др., 2018). Правила FDA требуют, чтобы в конечном продукте 26 содержалось менее 0,1% обнаруживаемых гамма-облученных фидерных клеток (Lapteva et al. , 2012). Таким образом, иммунные эффекторные клетки, размноженные фидерными клетками K562, были одобрены FDA для клинических испытаний (NKEXP и NKCD19; номера Clinicaltrials.gov NCT00640796 и NCT00995137).

В нашей работе мы решили сосредоточиться на популяции Т-клеток Vγ9Vδ2, потому что это подгруппа, безопасность и эффективность которой наиболее тщательно изучены 27,28,29 (Fisher, Heuijerjans, Yan, Gustafsson, & Anderson , 2014; Fournie et al., 2013; Кобаяши и Танака, 2015 г.). Это отличает нашу работу от работы Денигера, хотя их протокол экспансии для поликлональной популяции γδ-T-клеток остается впечатляющим. Ключевым фактором, отличающим нашу работу от работы Чо и др. затем является начальной стадией обогащения Т-клеток Vγ9Vδ2 из общей популяции РВМС с помощью ZOL и IL-2 по сравнению с сортировкой клеток. Как объяснялось в предыдущем разделе, использование ZOL для обогащения Т-клеток Vγ9Vδ2 было хорошо подтверждено и требует присутствия дополнительных клеток, таких как моноциты и другие положительные клетки MHC класса II. Использование фидерных клеток K562, как продемонстрировано Deniger et al., по-видимому, не способствует какой-либо конкретной подгруппе γδ-T и просто служит для численного расширения популяции. Таким образом, двухэтапный протокол, разработанный в нашей статье, использует способность ZOL обогащать Т-клетки Vγ9Vδ2 и способность фидерных клеток K562 численно расширять обогащенную популяцию.

В нашем двухэтапном протоколе (рис. 1) устойчивая и селективная активация Т-клеток Vγ9Vδ2 была достигнута на первом этапе за счет использования ZOL перед сортировкой 4 (Xiao et al., 2018). Своевременная магнитная сортировка на 7-й день после активации удалит примеси NK и αβ Т-клеток, но сохранит статус активации Т-клеток Vγ9Vδ2. Это проявляется в мощном кратном размножении Т-клеток Vγ9Vδ2 до 537340 ± 607389 за 17 дней. Это самый быстрый и самый высокий показатель размножения Т-клеток Vγ9Vδ2, который мы наблюдали на сегодняшний день. Хотя может быть беспокойство, связанное с высоким соотношением Vγ9Vδ2 T к K562, используемым при 1:100, мы смогли доказать минимальные остаточные фидерные клетки на 17-й день, и что общее использование фидерных клеток K562 было ограничено одним разом за все время.

В нашем собственном исследовании 4 также был продемонстрирован тот факт, что клетки K562 могут поддерживать более длительное культивирование in vitro по сравнению с типичным 10–14-дневным периодом в методах на основе цитокинов (Xiao et al., 2018). . Мы сообщали, что 10-дневный период совместного культивирования с K562 привел к снижению классических маркеров истощения Т-клеток, таких как CTLA-4, LAG3, TIM3 и BTLA4. День 17 Т-клетки Vγ9Vδ2 были активированы и обладали высокой цитотоксичностью в отношении раковых клеток, обработанных ZOL. Анализы цитотоксичности также не выявили каких-либо различий между Т-клетками Vγ9Vδ2 с размножением ZOL/IL-2 на 7-й день и Т-клетками Vγ9Vδ2 с размножением K562 на 17-й день (неопубликованные данные).Несмотря на отсутствие наблюдаемых in vitro различий в цитотоксичности, подавленная экспрессия ингибиторов иммунных контрольных точек могла, возможно, свести на нет сильно иммуносупрессивное микроокружение опухоли и поддерживать противоопухолевую активность in vivo.

Огромное числовое расширение объясняется использованием анти-CD3-антитела OKT3, которое нацелено на эпсилон-цепь CD3, экспрессируемую на γδ-T-клетках. Важно отметить, что мы основывались на интересном наблюдении Dopfer et al. что OKT3 может способствовать значительной секреции цитокинов и пролиферации Т-клеток Vγ9Vδ2 10 (Dopfer et al., 2014). Наша фидерная клеточная линия K562 спроектирована так, чтобы экспрессировать CD64, который представляет собой высокоаффинный человеческий рецептор IgG FcγRI. Таким образом, взаимодействие между OKT3 и CD64 способствует межклеточному контакту между Т-клетками K562 и Vγ9Vδ2, что, в свою очередь, обеспечивает лучшее взаимодействие между CD86 и CD137L, экспрессируемыми на нашей линии фидерных клеток K562, и костимулирующими молекулами CD28 и CD137, экспрессируемыми на Vγ9Vδ2 T. ячейки соответственно.

Чтобы подготовить почву для будущих клинических испытаний и приложений с этими Т-клетками Vγ9Vδ2 с размножением K562, мы испытали использование системы G-Rex (Wilson Wolf, США) на втором этапе нашего протокола размножения. G-Rex предназначен для поддержки клеточных культур с низкой плотностью посева клеток при 0,125×10 6 /см 2 30 (Bajgain et al., 2014). Его ключевой особенностью является газопроницаемая силиконовая мембрана на дне, которая способствует эффективному обмену O2 и CO2, что позволяет добавлять больше среды на единицу площади поверхности. При этом частота обмена средами снижается, а повышенная поддержка питательными веществами также повышает выживаемость клеток 31 (Vera et al., 2010). Его компактная конструкция и более низкая потребность в рабочей силе также обеспечивают масштабируемость при крупномасштабном производстве ячеек, что является важным фактором для коммерциализации.В нашей работе мы высевали 1×10 6 день 7 ZOL-активированных Т-клеток Vγ9Vδ2 с 1×10 8 облученных фидерных клеток K562 при соотношении кокультуры 1: 100 4 (Xiao et al., 2018). С помощью этого медицинского устройства класса I, зарегистрированного Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA), мы смогли добиться расширения от 1000 до 15 000 раз всего за 10 дней. Таким образом, использование G-Rex позволяет нам получить клинически значимое количество клеток, необходимое для эффективного терапевтического вмешательства.

Недавно появились опасения по поводу патогенной природы некоторых γδ-T-клеток.Действительно, было отмечено, что поликлональные γδ-T-клетки, размноженные K562 aAPC, секретируют цитокины Th27, включая IL-17, при активации коктейлем активации лейкоцитов 3 (Deniger et al., 2014). Тем не менее, в том же эксперименте была показана значительная секреция гамма-интерферона (IFN-γ), который является хорошим суррогатным маркером цитотоксичности. Дополнительные эксперименты показали, что субпопуляция Vδ2 была основным источником IFN-γ, что указывает на то, что T-клетки Vγ9Vδ2 могут составлять большинство популяции поликлональных γδ-T-клеток.В другом обзоре указано, что γδ-T-клетки могут иметь профиль Th3 или Th27 в зависимости от среды цитокинов в микроокружении. Тем не менее, эти результаты в значительной степени основаны на результатах экспериментов in vitro, а не на доклинических моделях 32 (Xiang & Tu, 2017). Это остается проблемой, и необходимо собрать больше доклинических данных, чтобы понять механизм, лежащий в основе того, что γδ-T-клетки принимают профиль Th27 в определенном микроокружении опухоли. Со своей стороны, мы снизили этот риск, сосредоточив внимание на подмножестве Vγ9Vδ2, которое, как известно, экспрессирует сигнатуру Th2, при этом большинство из них продуцирует провоспалительный IFN-γ, а меньшинство (<5%) секретирует IL-17 33 (Patil, Бхат, Дар и Чиплункар, 2015 г.).

Совместное использование ZOL и Т-клеток Vγ9Vδ2 демонстрирует явный терапевтический эффект в клинических испытаниях у пациентов, достигших частичной ремиссии при распространенном раке молочной железы и предстательной железы и полной ремиссии у пациентов с ПКР с метастазами в легкие. Однако некоторые раковые клетки устойчивы к лечению ZOL и плохо реагируют на Т-клетки Vγ9Vδ2. Чтобы усилить противоопухолевую активность этих размноженных K562 Т-клеток Vγ9Vδ2, мы показали в нашей работе, что CAR-привитые Т-клетки Vγ9Vδ2 эффективно действуют против EpCAM-позитивных раковых клеток. Учитывая их склонность к эпителиальным тканям и антигенную специфичность, которую может обеспечить технология CAR, γδ-T-клетки имеют огромный потенциал для клинического применения против различных солидных опухолей.

Значительной вехой в генной терапии и адоптивной клеточной терапии стало недавнее одобрение FDA CAR-T-клеток для использования при рецидивирующих В-клеточных злокачественных опухолях. Однако зависимость от аутологичных αβ-T-клеток для проведения этих противоопухолевых усилий наложила огромные ограничения на логистику и управление цепочками поставок, от индивидуального сбора образцов у пациентов до расширения ex vivo, генетической модификации и контроля качества.Это значительно увеличило затраты и время, необходимое для эффективных терапевтических вмешательств. В этом аспекте Т-клетки Vγ9Vδ2 представляют собой чрезвычайно жизнеспособный вариант для замены обычных αβ-Т-клеток в качестве готового иммунотерапевтического средства. Внутренняя противоопухолевая активность γδ-клеток в сочетании с их MHC-независимым образом действия делает их идеальными аллогенными готовыми эффекторными клетками для иммунотерапии рака. Узким местом было крупномасштабное распространение этих дефицитных клеток, и это было в разной степени преодолено с помощью различных описанных методов.Мы считаем, что в будущих клинических испытаниях с участием Т-клеток Vγ9Vδ2 будет изучено комбинированное использование с другими терапевтическими агентами, такими как CAR и ингибиторы иммунных контрольных точек. В нашей недавней публикации 4 (Xiao et al., 2018) мы предоставили экономичный метод для достижения крупномасштабного размножения этих Т-клеток Vγ9Vδ2, а также подтвердили их комбинаторное использование с технологией CAR. Наше использование фидерных клеток K562, экспрессирующих CD64, CD86 и CD137L, также снизило риск истощения Т-клеток Vγ9Vδ2 в результате длительного периода культивирования in vitro.Будущие усилия в нашей и других лабораториях должны быть направлены на постоянное улучшение качества размноженных Т-клеток Vγ9Vδ2 при одновременном снижении стоимости терапии, тем самым позволяя терапии эффективно достигать массы.

  1. Vantourout P, ​​Hayday A. Шесть лучших: уникальный вклад гамма-дельта Т-клеток в иммунологию. Нат Рев Иммунол. 2013; 13(2): 88-100. дои: 10.1038/nri3384
  2. Welsh RM, Lin MY, Lohman BL, et al. Сети альфа-бета и гамма-дельта Т-клеток и их роль в естественной устойчивости к вирусным инфекциям.Иммунол, версия 1997; 159: 79-93.
  3. Deniger DC, Maiti SN, Mi T и др. Активация и размножение поликлональных гамма-дельта Т-клеток с широкой специфичностью в отношении злокачественных новообразований. Клин Рак Рез. 2014; 20(22): 5708-5719. doi:10.1158/1078-0432.CCR-13-3451
  4. Сяо Л., Чен С., Ли З. и др. Крупномасштабное размножение Т-клеток Vgamma9Vdelta2 с помощью сконструированных фидерных клеток K562 в сосудах G-Rex и их использование в качестве эффекторных клеток, модифицированных химерным антигенным рецептором. Цитотерапия. 2018; 20(3): 420-435.doi:10.1016/j.jcyt.2017.12.014
  5. Йошикава Т., Такахара М., Томияма М. и др. Крупномасштабная экспансия гамма-дельта Т-клеток и пептид-специфических цитотоксических Т-клеток с использованием золедроната для адоптивной иммунотерапии. Int J Oncol. 2014; 45(5): 1847-1856. doi:10.3892/ijo.2014.2634
  6. Harrer DC, Simon B, Fujii SI, et al. РНК-трансфекция гамма/дельта Т-клеток химерным антигенным рецептором или альфа/бета Т-клеточным рецептором: более безопасная альтернатива генно-инженерным альфа/бета Т-клеткам для иммунотерапии меланомы.БМК Рак. 2017; 17(1): 551. doi:10.1186/s12885-017-3539-3
  7. Эберт Л.М., Меутер С., Мозер Б. Самонаведение и функция Т-клеток и NK-клеток кожи человека: актуальность для наблюдения за опухолями. Журнал иммунологии. 2006 г.; 176(7): 4331-4336. doi:10.4049/jиммунол.176.7.4331
  8. Нильсен М.М., Уизерден Д.А., Хавран В.Л. гамма-дельта Т-клетки в гомеостазе и защите хозяина тканей эпителиального барьера. Нат Рев Иммунол. 2017; 17(12): 733-745. doi:10.1038/nri.2017.101
  9. Davodeau F, Peyrat MA, Hallet MM, et al.Периферический отбор особенностей соединения антигенных рецепторов в основной подгруппе гамма-дельта человека. Евр Дж Иммунол. 1993 год; 23(4): 804-808. дои: 10.1002/эджи.1830230405
  10. Dopfer EP, Hartl FA, Oberg HH, et al. Конформационное изменение CD3 в гамма-дельта Т-клеточном рецепторе не запускается антигенами, но может усиливать уничтожение опухоли. Представитель Cell 2014; 7(5): 1704-1715. doi:10.1016/j.celrep.2014.04.049
  11. Kavanagh KL, Guo K, Dunford JE, et al. Молекулярный механизм действия азотсодержащих бисфосфонатов как средств против остеопороза.Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103(20): 7829-7834. doi:10.1073/pnas.0601643103
  12. Рулофс А.Дж., Яухиайнен М., Монкконен Х. и др. Моноциты периферической крови ответственны за активацию гамма-дельта Т-клеток, индуцированную золедроновой кислотой посредством накопления IPP/DMAPP. Бр Дж Гематол. 2009 г.; 144(2): 245-250. doi:10.1111/j.1365-2141.2008.07435.x
  13. Сориано-Сарабия Н., Сандволд Х., Джомаа Х. и др. Первичные клетки MHC класса II (+) необходимы для стимулирования роста покоящихся клеток Vdelta2 в ответ на (E)-4-гидрокси-3-метил-бут-2-енил-пирофосфат и изопентенилпирофосфат. Дж Иммунол. 2012 г.; 189(11): 5212-5222. doi:10.4049/jиммунол.1200093
  14. Салот С., Берсегей С., Дрено Б. и др. Крупномасштабное размножение Т-лимфоцитов Vgamma9Vdelta2 из мононуклеарных клеток периферической крови человека после положительной селекции с использованием MACS «Набор для выделения TCR гамма/дельта+ Т-клеток». Дж Иммунол Методы. 2009 г.; 347(1-2): 12-18. doi:10.1016/j.jim.2009.05.006
  15. Меррик А., Эррингтон Ф., Милвард К. и др. Иммуносупрессивные эффекты радиации на дендритные клетки человека: снижение продукции IL-12 при активации и нарушении примирования наивных Т-клеток.Бр Дж Рак. 2005 г.; 92(8): 1450-1458. дои: 10.1038/sj.bjc.6602518
  16. Pechhold K, Wesch D, Schondelmaier S, et al. Первичная активация экспрессирующих гамма-дельта Т-клеток V гамма 9 микобактериями туберкулеза. Потребность в помощи CD4 Т-клеток Th2-типа и ингибировании IL-10. Дж Иммунол. 1994 год; 152(10): 4984-4992.
  17. Докухаки П., Хан М., Джо Б. и др. Адаптивная иммунотерапия рака с использованием ex vivo размноженных гамма-дельта Т-клеток человека: новый подход. Письма Рака. 2010 г.; 297(1): 126-136.doi:10.1016/j.canlet.2010.05.005
  18. Кондо М., Сакута К., Ногучи А. и др. Золедронат способствует крупномасштабной экспансии ex vivo функциональных гамма-дельта Т-клеток у онкологических больных для использования в адоптивной иммунотерапии. Цитотерапия. 2008 г.; 10(8): 842-856. дои: 10.1080/14653240802419328
  19. Феррарини М., Дельфанти Ф., Джанолини М. и др. NF-каппа B модулирует чувствительность к апоптозу, провоспалительный и миграционный потенциал в краткосрочных и долгосрочных культивируемых гамма-дельта-лимфоцитах человека.Дж Иммунол. 2008 г.; 181(9): 5857-5864.
  20. Кондо М., Изуми Т., Фудзиэда Н. и др. Расширение гамма-дельта Т-клеток периферической крови человека с использованием золедроната. J Vis Exp. 2011 г.; (55). дои: 10.3791/3182
  21. 21. Wilhelm M, Smetak M, Schaefer-Eckart K, et al. Успешный адоптивный перенос и экспансия in vivo гаплоидентичных γδ Т-клеток. Журнал трансляционной медицины. 2014; 12(1): 45. doi:10.1186/1479-5876-12-45
  22. Уолпол С.К., Прието-Мерино Д., Эдвардс П. и др.Вес наций: оценка биомассы взрослого человека. Общественное здравоохранение BMC. 2012 г.; 12(1): 439. doi:10.1186/1471-2458-12-439
  23. Маус М.В., Томас А.К., Леонард Д.Г. и др. Расширение ex vivo поликлональных и антиген-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов с помощью искусственных АПК, экспрессирующих лиганды для Т-клеточного рецептора, CD28 и 4-1BB. Нац биотехнолог. 2002 г.; 20(2): 143-148. doi:10.1038/nbt0202-143
  24. Imai C, Iwamoto S, Campana D. Генетическая модификация первичных естественных клеток-киллеров преодолевает ингибирующие сигналы и вызывает специфическое уничтожение лейкемических клеток.Кровь. 2005 г.; 106(1): 376-383. doi: 10.1182 / кровь-2004-12-4797
  25. Чо Х.В., Ким С.Ю., Сон Д.Х. и др. Тройная костимуляция с помощью лиганда CD80, 4-1BB и CD83 вызывает долгосрочный рост Т-клеток Vgamma9Vdelta2 при низких уровнях IL-2. Дж. Лейкок Биол. 2016; 99(4): 521-529. doi:10.1189/jlb.1HI0814-409RR
  26. Лаптева Н., Дюретт А.Г., Сан Дж. и др. Крупномасштабное размножение ex vivo и характеристика естественных клеток-киллеров для клинического применения. Цитотерапия. 2012 г.; 14(9): 1131-1143.дои: 10.3109/14653249.2012.700767
  27. Fisher JP, Heuijerjans J, Yan M, et al. гамма-дельта-Т-клетки для иммунотерапии рака: систематический обзор клинических испытаний. Онкоиммунология. 2014; 3(1): e27572. doi:10.4161/onci.27572
  28. Fournie JJ, Sicard H, Poupot M, et al. Какие уроки можно извлечь из испытаний иммунотерапии рака на основе гамма-дельта-Т-клеток. Селл Мол Иммунол. 2013; 10(1): 35-41. doi: 10.1038 / cmi.2012.39
  29. Кобаяши Х., Танака Ю. gammadelta Т-клеточная иммунотерапия – обзор.Фармацевтика (Базель). 2015 г.; 8(1): 40-61. дои: 10.3390/ph8010040
  30. Баджгейн П., Мучарла Р., Уилсон Дж. и др. Оптимизация производства суспензионных клеток с использованием серии G-Rex «M». Mol Ther Methods Clin Dev. 2014; 1: 14015. doi:10. 1038/mtm.2014.15
  31. Vera JF, Brenner LJ, Gerdemann U, et al. Ускоренное производство антиген-специфических Т-клеток для доклинических и клинических применений с использованием газопроницаемой посуды для быстрого размножения (G-Rex). J Иммунотер. 2010 г.; 33(3): 305-315.дои: 10.1097/CJI.0b013e3181c0c3cb
  32. Xiang Z, Tu W. Двойное лицо клеток Vγ9Vδ2-T в опухолевой иммунологии: противоопухолевое и проопухолевое действие. Границы в иммунологии. 2017; 8: 1041. doi:10.3389/fimmu.2017.01041
  33. Патил Р.С., Бхат С.А., Дар А.А. и др. История Джекила и Хайда о гамма-дельта-Т-клетках, продуцирующих IL17. Фронт Иммунол. 2015 г.; 6: 37. doi:10.3389/fimmu.2015.00037
  34. Liu Z, Guo BL, Gehrs BC, et al. Размноженные ex vivo человеческие клетки Vgamma9Vdelta2+ gammadelta-T опосредуют врожденную противоопухолевую активность против клеток рака предстательной железы человека in vitro.Дж Урол. 2005 г.; 173(5): 1552-1556.
  35. Салот С., Лаплас С., Сайя С. и др. Крупномасштабная экспансия гамма 9 дельта 2 Т-лимфоцитов: продукт Innacell для терапии гамма-дельта-клетками. Дж Иммунол Методы. 2007 г.; 326(1-2): 63-75. doi:10.1016/j.jim.2007.07.010
  36. Ли В., Кубо С., Окуда А. и др. Влияние ИЛ-18 на размножение гамма-дельта Т-клеток, стимулированное золедронат и ИЛ-2. J Иммунотер. 2010 г.; 33(3): 287-296. doi: 10.1097/CJI.0b013e3181c80ffa
  37. Van Acker HH, Anguille S, Willemen Y, et al.Интерлейкин-15 усиливает пролиферацию, стимулирующий фенотип и противоопухолевую эффекторную функцию гамма-дельта Т-клеток человека. J Гематол Онкол. 2016; 9(1): 101. doi:10.1186/s13045-016-0329-3

 

Гамма-протокадгерины регулируют функциональную целостность цепи питания гипоталамуса у мышей

. 2010 март 1; 339 (1): 38-50.

doi: 10.1016/j.ydbio.2009.12.010.

Epub 2009 16 декабря.

Принадлежности

Расширять

принадлежность

  • 1 Кафедра биохимии, молекулярной биологии и клеточной биологии, Северо-западный университет, 2205 Tech Drive, Hogan 2-100, Evanston, IL 60208-3500, США.

Бесплатная статья ЧВК

Элемент в буфере обмена

Хун Су и др.

Дев биол.

.

Бесплатная статья ЧВК

Показать детали

Показать варианты

Показать варианты

Формат

АннотацияPubMedPMID

.2010 март 1; 339 (1): 38-50.

doi: 10.1016/j.ydbio.2009.12.010.

Epub 2009 16 декабря.

принадлежность

  • 1 Кафедра биохимии, молекулярной биологии и клеточной биологии, Северо-западный университет, 2205 Tech Drive, Hogan 2-100, Evanston, IL 60208-3500, США.

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки
Параметры отображения цитирования

Показать варианты

Формат
АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Цепи нейронов гипоталамуса, которые модулируют энергетический гомеостаз, становятся зрелыми и функциональными в течение ранней постнатальной жизни.Однако молекулярный механизм, лежащий в основе этого процесса развития, остается в значительной степени неизвестным. Здесь мы используем генетический подход мыши для исследования роли гамма-протокадгеринов (Pcdh-гаммы) в нейронных цепях гипоталамуса. Во-первых, мы показываем, что мыши с условным нокаутом крысиного инсулинового промотора (RIP)-Cre, лишенные Pcdh-gamma в широком подмножестве гипоталамических нейронов, страдают ожирением и гиперфагией. Во-вторых, специфическая делеция Pcdh-gamma в нейронах, экспрессирующих анорексигенный проопиомеланокортин (POMC), также приводит к ожирению.Используя отслеживание клеточных линий, мы показываем, что нейроны, экспрессирующие POMC и RIP-Cre, не перекрываются, а взаимодействуют друг с другом в гипоталамусе. Кроме того, возбуждающие синаптические входы снижены в Pcdh-гамма-дефицитных нейронах POMC. Генетические данные обеих нокаутных моделей показывают, что Pcdh-гаммы могут регулировать функцию нейронов POMC автономно и неавтономно посредством межклеточного взаимодействия. В совокупности наши данные демонстрируют, что Pcdh-гаммы регулируют формирование и функциональную целостность гипоталамической цепи питания у мышей.

Copyright 2009 Elsevier Inc. Все права защищены.

Цифры

Рисунок 1. Делеция Pcdh-γs в поджелудочной железе…

Рисунок 1.Делеция Pcdh-γs в панкреатических островках и субпопуляциях нейронов гипоталамуса из RIPCre;…


Рисунок 1. Делеция Pcdh-γs в панкреатических островках и подмножествах гипоталамических нейронов из RIPCre; Pcdh-γ fC3/fC3 мыши

А . Схема условного аллеля Pcdh-γ fC3 . Б . RIP-Cre экспрессируется в β-клетках поджелудочной железы и областях гипоталамуса, включая дугообразное ядро ​​(ARH), вентрально-медиальный гипоталамус (VMH), дорсально-медиальный гипоталамус (DMH), паравентрикулярное ядро ​​(PVN, не включено в это изображение) и латеральной области гипоталамуса (LH).Показаны LacZ-положительные срезы поджелудочной железы (слева) и головного мозга (справа) из RIPCre; Мыши R26R-LacZ . С . Окрашивание GFP (зеленый) и инсулина (красный) показывает, что Pcdh-γ отсутствуют в большинстве β-клеток поджелудочной железы мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre . Д . Гибридизация in situ для мРНК Pcdh-γ-GFP показывает, что транскрипты Pcdh-γ отсутствуют в подгруппах нейронов гипоталамуса. (Красный: рибозонд GFP; синий: контрастное окрашивание DAPI).

Рисунок 2. Мыши Pcdh-γ KO RIP-Cre

Рисунок 2. Мыши Pcdh-γ KO RIP-Cre с ожирением и гиперфагией

А . Продольное исследование массы тела.…


Рисунок 2. Мыши Pcdh-γ KO RIP-Cre с ожирением и гиперфагией.

А . Продольное исследование массы тела. Показаны кривые массы тела самцов (n=13-19/генотип) и самок (n=10-13/генотип) Pcdh-γ KO RIP-Cre и однопометных контрольных мышей. Б . Состав тела 12-недельных животных. Женщины: n=17-19/генотип. Мужчины: n=18-19/генотип. Все значения представляют собой групповые средние ± SEM.* р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,0001. С . Ежедневное потребление пищи мышами Pcdh-γ KO RIP-Cre . Д . Компенсаторная реакция возобновления питания. Первый 24-часовой прием пищи и процент восстановления веса, измеренные после 48-часового голодания, не выявили существенных различий между Pcdh-γ KO RIP-Cre и контрольными мышами.

Рис. 3.Повышенный апоптоз в гипоталамусе…

Рисунок 3. Повышение апоптоза в гипоталамусе мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre

А . Окраска по Нисслю…


Рисунок 3. Повышенный апоптоз в гипоталамусе мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre .

А .Окрашивание по Нисслю коронарных срезов головного мозга выявляет нормальную морфологию гипоталамуса у взрослых мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre . Б . Включение BrdU не показывает существенных различий в нейрогенезе на E12.5 и E14.5. С&D . Репрезентативные микрофотографии, показывающие активные клетки, положительные к каспазе-3, в гипоталамусе на P0 и P5. Ф . Количественный анализ показывает увеличение апоптотических клеток в гипоталамусе новорожденных мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre на P0, но не на P5.Среднее количество суммарных активных каспаз-3-положительных клеток подсчитывали в серии из 12 срезов через весь гипоталамус. P0, n = 5 на группу; P5, n=3 в группе. Ф . Двойная иммуногистохимия для активной каспазы 3 (красный) и TuJ (слева, зеленый) или GFAP (справа, зеленый) показывает, что апоптотические клетки положительны по маркеру нейронов TuJ и отрицательны по маркеру линии клеток глии GFAP. CTL: RIPCre; Pcdh-γ + /fC3 ; РИПКреКО: РИПКре; Pcdh-γ fC3/fC3 .* p < 0,05, ** по сравнению с контрольными группами.

Рисунок 4. Межклеточные взаимодействия между RIP-Cre, экспрессирующими…

Рисунок 4. Межклеточные взаимодействия между клетками, экспрессирующими RIP-Cre, и нейронами POMC

А .Схема…


Рисунок 4. Межклеточные взаимодействия между клетками, экспрессирующими RIP-Cre, и нейронами POMC.

А . Схема, показывающая расположение и проекцию RIP-Cre-положительных (зеленый) и POMC-положительных (красный) нейронов в гипоталамусе. Б . В RIP-Cre; Репортерные трансгенные мыши ROSA26-GFP , клеточные тела RIP-Cre-положительных и POMC-нейронов помечены антителами против GFP (зеленый) и против POMC (красный) соответственно.В ARH положительные клетки RIP-Cre прилегают к нейронам POMC. С&D . В POMC-Cre; Репортерные мыши mT/mG , связанные с мембраной GFP, метят сому нейронов POMC (C) в ARH и проекции аксонов (D) в DMH. Антитело кролика против РОМС использовали для мечения сомы РОМС, а антитело овцы против α-МСГ использовали для проекции нейронов. Отмечено, что окрашивание антител α-MSH частично очерчивает нейронные отростки POMC (D) по сравнению с GFP. Э . В RIP-Cre; Репортерные мыши mT/mG , нейронные отростки (зеленые) соседних клеток, экспрессирующих RIP-Cre, соединяются с сомой нейронов POMC (красные) в ARH. Слева показана одна конфокальная плоскость. Ф . В ARH и DMH положительные нейронные отростки α-MSH (красные) также контактируют с сомой нейронов, экспрессирующих RIP-cre. Показаны конфокальные изображения. Г . Положительные аксоны α-MSH (красные) направляются к DMH и взаимодействуют с мембранными GFP-мечеными клетками, экспрессирующими RIP-Cre. Х . В ARH экспрессирующие RIP-Cre клетки (зеленые) положительны по VGlut2 (красные). Стержни 25 мкм.

Рисунок 5.Pcdh-γ неавтономно регулируют транскрипцию POMC…

Рисунок 5. Pcdh-γ неавтономно регулируют транскрипцию POMC у мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre

А . мРНК…


Рисунок 5. Pcdh-γ неавтономно регулируют транскрипцию POMC у мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre .

А .Экспрессию мРНК различных нейропептидов измеряли с помощью RT-qPCR у 14- и 30-недельных животных. Экспрессия РОМС значительно снижается в обоих возрастах, в то время как AgRP снижается в возрасте 14 недель, но не в возрасте 30 недель. Б . Экспрессия POMC значительно снижена у мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre на P25. Показаны микрофотографии окрашивания анти-α-МСГ (нейропептид, полученный из предшественника РОМС). 3V: 3 рд желудочек. С . RT-qPCR анализ экспрессии мРНК POMC в гипоталамусе Pcdh-γ KO RIP-Cre и контрольных мышей в возрасте P0, P10, P25, 14 недель и 30 недель.GAPDH используется для нормализации поступления РНК. Все значения являются средними значениями ± SEM. * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,0001 по сравнению с контрольными группами. n = 7~9 каждого генотипа. Д . Микрофотографии, показывающие, что Stat3 активируется внутрибрюшинно. инъекция лептина в обоих генотипах. Аналогичное количество pSTAT3 (желтых) положительных клеток обнаружено у Pcdh-γ KO RIP-Cre и контрольных мышей после инъекции лептина. Некоторые дугообразные нейроны дважды помечены (вставка, полоса = 50 мкм) как для pSTAT3 (зеленый), так и для α-MSH (красный), что показывает, что нейроны POMC активируются лептином у мутантных мышей. Э . Дефицит Bax ингибирует апоптоз в развивающемся гипоталамусе. Активные клетки, положительные к каспазе-3, практически отсутствуют в RIP-Cre; Pcdh-γ fC3/fC3 ; Bax -/- новорожденных мышей. Ф . Снижение экспрессии POMC не зависит от апоптоза у мышей Pcdh-γ KO RIP-Cre . Окрашивание α-MSH показывает, что экспрессия POMC значительно снижена в RIP-Cre; Pcdh-γ fC3/fC3 ; Bax -/- мышей.

Рисунок 6. Мыши Pcdh-γ KO POMC-Cre

Рисунок 6. Pcdh-γ KO Мыши POMC-Cre с ожирением и гиперфагией

А . Сравнение массы тела…


Рисунок 6.Мыши Pcdh-γ KO POMC-Cre страдают ожирением и гиперфагией

А . Сравнение массы тела Pcdh-γ KO POMC-Cre и однопометных контрольных мышей в возрасте 8 и 12 недель. CTL: n = 16~19, POMCCreKO: n = 10~13. Б . Исследование ежедневного потребления пищи Pcdh-γ KO POMC-Cre и однопометных контрольных мышей в возрасте 10 недель. Мужчины: n = 5~6 на группу; женщины: n = 7~12 на группу. С . Сравнение жирового состава и безжировой массы у Pcdh-γ KO POMC-Cre и однопометных контрольных мышей в возрасте 8 и 12 недель. CTL: n = 16~18, POMCCreKO: n = 10~13. ** р < 0,01, *** р < 0,0001.

Рисунок 7. Роль Pcdh-γ в…

Рисунок 7. Роль Pcdh-γs в нейронах POMC

АиБ .Снижение постнатальной POMC…


Рисунок 7. Роль Pcdh-γs в нейронах POMC.

АиБ . Снижение постнатальной экспрессии POMC. Гипоталамическая экспрессия POMC значительно снижена у мышей Pcdh-γ KO POMC-Cre . Репрезентативная иммуногистохимия α-MSH показана на A, а результаты RT-qPCR показаны на B. n = 7 ~ 9 для каждого генотипа. С . Индуцированные лептином c-fos положительные клетки присутствуют в ARH мышей Pcdh-γ KO POMC-Cre . Желтый: c-fos; синий: ДАПИ. ARH обведен пунктирной линией. Д . Некоторые нейроны ARH являются положительными как для α-MSH, так и для c-fos после инъекции лептина. Э . Иммуно-ЭМ-микрофотографии, показывающие симметричные (S) и асимметричные (AS) синапсы в нейронах POMC, помеченных LacZ . Верх: POMC-Cre; Pcdh-γ fC3/fC3 ; R26R-LacZ; снизу: POMC-Cre; Pcdh-γ fC3/ + ; R26R-LacZ . Фиолетовый *: сигналы NanoGold, используемые для идентификации LacZ-положительных клеток; Пре: пресинаптический бутон; NE: ядерная оболочка; ПМ: плазматическая мембрана. Ф . Количественный анализ асимметричных (возбуждающих) и симметричных (тормозных) синапсов на плазматической мембране нейронов ПОМК (n = 15~17). Показаны средние числа синапсов на 50 мкм перикариальной мембраны. Все значения представляют собой групповые средние ± SEM. *** р < 0,0001.

Все фигурки (7)

Похожие статьи

  • гамма-протокадгерины регулируют выживание нейронов, но они не нужны для формирования цепей в сетчатке.

    Лефевр Дж.Л., Чжан И., Мейстер М., Ван Х., Санес Дж.Р.
    Лефевр Дж.Л. и соавт.
    Разработка. 2008 г., декабрь; 135 (24): 4141-51. дои: 10.1242/dev.027912.
    Разработка. 2008.

    PMID: 144
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Созревание постнатально сгенерированных гранулярных клеток обонятельной луковицы зависит от функциональной экспрессии γ-протокадгерина.

    Леддероз Дж., Дитер С., Шварц М.К.Леддероз Дж. и соавт.
    Научный доклад 2013; 3:1514. дои: 10.1038/srep01514.
    Научный представитель 2013.

    PMID: 23515096
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Гомофильное взаимодействие гамма-протокадгерина и внутриклеточный транспорт контролируются цитоплазматическим доменом в нейронах.

    Фернандес-Монреаль М., Канг С., Филлипс Г.Р.
    Фернандес-Монреаль М. и др.
    Мол Селл Нейроски. 2009 март; 40(3):344-53.doi: 10.1016/j.mcn.2008.12.002. Epub 2008 16 декабря.
    Мол Селл Нейроски. 2009.

    PMID: 1

    62
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Гипоталамические не-AgRP, не-POMC ГАМКергические нейроны необходимы для кормления после отъема и гиперфагии NPY.

    Ким Э.Р., У Зи, Сун Х., Сюй И., Мангьери Л.Р., Сюй И., Тонг К.
    Ким Э.Р. и др.
    Дж. Нейроски. 2015 22 июля; 35 (29): 10440-50. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1110-15.2015.
    Дж. Нейроски. 2015.

    PMID: 26203139
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Экспрессия белка протокадгерин-γC4 в мозге крыс.

    Miralles CP, Taylor MJ, Bear Jr, Fekete CD, George S, Li Y, Bonhomme B, Chiou TT, De Blas AL.
    Мираллес С.П. и др.
    J Комп Нейрол. 2020 1 апреля; 528 (5): 840-864. doi: 10.1002/cne.24783. Epub 2019 6 ноября.
    J Комп Нейрол. 2020.PMID: 31609469
    Бесплатная статья ЧВК.

Цитируется

18
статьи

  • Кластерные протокадгерины появляются как новые локусы восприимчивости к психическим расстройствам.

    Цзя Зи, Ву Ц.
    Цзя Зи и др.
    Фронтальные нейроски. 2020 12 ноя; 14:587819. дои: 10.3389/fnins.2020.587819. Электронная коллекция 2020.
    Фронтальные нейроски. 2020.

    PMID: 33262685
    Бесплатная статья ЧВК.

    Рассмотрение.

  • γ-Протокадгерины регулируют выживание ГАМКергических интернейронов во время гибели клеток в процессе развития.

    Карриер Ч. , Ван В. С., Синг А. Д., Фекете А., Джонс Б. Е., Йи И., Эллегуд Дж., Маганти Х., Авофала Л., Мароча Дж., Азиз А., Ван Л.И., Лерх Д.П., Лефевр Д.Л.
    Carriere CH, et al.Дж. Нейроски. 2020 4 ноября; 40 (45): 8652-8668. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1636-20.2020. Epub 2020 15 октября.
    Дж. Нейроски. 2020.

    PMID: 33060174
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Исследование CRISPR/Cas9 кластера генов мыши Pcdhg выявило критическую изоформно-специфическую роль Pcdhgc4.

    Гаррет А.М., Бош П.Дж., Штеффен Д.М., Фуллер Л.С., Маркуччи К.Г., Кох А.А., Байс П., Вайнер Д.А., Берджесс Р.В.Гаррет А.М. и соавт.
    Генетика PLoS. 26 декабря 2019 г .; 15 (12): e1008554. doi: 10.1371/journal.pgen.1008554. Электронная коллекция 2019 декабрь.
    Генетика PLoS. 2019.

    PMID: 31877124
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Комбинаторные эффекты альфа- и гамма-протокадгеринов на выживание нейронов и самоизбегание дендритов.

    Инг-Эстевес С., Костадинов Д., Мароча Дж., Синг А.Д., Джозеф К.С., Лабулайе М.А., Санес Дж.Р., Лефевр Дж.Л.Инг-Эстевес С. и соавт.
    Дж. Нейроски. 2018 14 марта; 38 (11): 2713-2729. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3035-17.2018. Epub 2018 8 февраля.
    Дж. Нейроски. 2018.

    PMID: 29439167
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Сгруппированные протокадгерины необходимы для построения функциональных нейронных цепей.

    Хасэгава С., Кобаяши Х., Кумагай М., Нисимару Х., Тарусава Э., Канда Х., Санбо М., Йошимура Ю., Хирабаяши М., Хирабаяши Т., Яги Т.Хасэгава С. и др.
    Фронт Мол Невроски. 2017 24 апр;10:114. doi: 10.3389/fnmol.2017.00114. Электронная коллекция 2017.
    Фронт Мол Невроски. 2017.

    PMID: 28484370
    Бесплатная статья ЧВК.

Типы публикаций

  • Поддержка исследований, Национальный институт здравоохранения, заочная
  • Поддержка исследований, за пределами США правительство

термины MeSH

  • Белки, связанные с кадгерином
  • Пищевое поведение / физиология*
  • Гипоталамус / физиология*
  • Островки Лангерганса / метаболизм
  • Микроскопия, Иммуноэлектроника
  • Полимеразной цепной реакции

вещества

  • Белки, связанные с кадгерином

LinkOut — больше ресурсов

  • Полнотекстовые источники

  • Базы данных молекулярной биологии

  • Разное

[Икс]

Укажите

Копировать

Формат:

ААД

АПА

МДА

НЛМ

ГАММА – Система Fres-co США

До 5000 пакетиков сухого или жидкого продукта в минуту

GAMMA представляет собой вертикальную машину непрерывного действия с вращающимися запаивающими роликами для производства прямоугольных четырехсторонних швов или пакетов-саше. Его можно интегрировать с любой системой подачи, и он может работать с пакетами большого диапазона размеров. Дозатор с осциллирующей чашкой — фирменная система дозирования, очень быстрая и чрезвычайно точная, специально разработанная для сыпучих порошков или гранул (сахара, соли, подсластителя, перца, сливок, молотого кофе, растворимого кофе, черного чая, растворимого чая, фармацевтических гранул). , так далее.). Серия GAMMA предлагает различные модели и дополнительные функции.

Наша группа технической поддержки упаковочного оборудования установит и протестирует GAMMA, а также обучит операторов и персонал, чтобы обеспечить работоспособность оборудования.

Применение в упаковке:

  • Кофе
  • Еда и напитки
  • Порошковые и гранулированные продукты

Особенности:

  • Сервоуправление
  • Машина для производства пакетов с четырехсторонним запечатыванием
  • 300 циклов в минуту
  • ПЛК Allen-Bradley
  • Интерфейс с сенсорным экраном
  • Количество дорожек от 2 до 24
  • Соответствует требованиям CE (насос-дозатор может быть сертифицирован 3A)
  • Максимальная ширина полотна 1200 мм

Системы наполнения:

  • Шнековые наполнители
  • Дозатор с чашкой-бассулирующей чашкой
  • Поршневой насос
  • Гравиметрический
  • Весы
  • Чашевые питатели
  • Счетные системы
  • Дозатор для таблеток

Отделка упаковки:

Опции:

  • Выемка
  • Рама из нержавеющей стали
  • Термопринтеры
  • Полностью автоматические системы подборки и упаковки в картонные коробки
  • Пакет в пакете или фильтровальная бумага
  • Моторизованное подъемное устройство для рулона пленки

Скорость производства:

  • До 5000 пакетов/мин (в зависимости от типа продукта, характеристик упаковочного материала и количества дорожек)

Размер упаковки Ширина:

Размер упаковки Длина:

Емкость:

(PDF) Повышенная эффективность γ-облученных фидерных клеток по сравнению с обработанными митомицином С для экспансии нормальных клеток человека в долгосрочных культурах

снижение экспрессии мембранных белков, любое значительное изменение клеточного метаболизма привести

к другим важным эффектам, таким как модуляция секреции растворимых факторов.

Быстрое снижение метаболической активности клеток L4.5

после обработки митомицином С должно быть вызвано плохо-

определенными эффектами, не наблюдаемыми в

g

-облученных клетках. Мито-

мицин С и

g

-облучение могут индуцировать апоптоз опухолевых клеточных линий

, и пути индуцированного апоптоза

могут быть разными (23–26). Митомицин С может вызывать нарушение трансмембранного митохондриального потенциала и

апоптоз каспаз-зависимым образом в нескольких клеточных

линиях (24,25).С другой стороны, апоптоз, индуцированный облучением

g

, по-видимому, меньше зависит от активации каспаз

и более значителен внутри пролиферирующих клеток, в G

2

, M,

900s клеточных фаз цикл (23,26). Эти наблюдения

могут объяснить наблюдаемую разницу между

g

-облученными и обработанными митомицином С фидерными клетками, потому что мы использовали все способы получения L4. 5 ячеек при слиянии, что означает, что ячейки

находятся в фазе G

1

. Как упоминалось ранее, клетки L4.5

происходят из клеточной линии L929 (17), и общепризнанно

, что фибробластные клетки, такие как L929, перестают расти при кон-

плавности и останавливаются в конце G

1

фаза (27). Таким образом, побочные эффекты

g

-облучения будут минимальными в клетках, обработанных

при слиянии, в то время как обработка митомицином С,

эффект которого предположительно не зависит от клеточного цикла, должна иметь

тот же эффект, независимо от того, активны ли клетки. размножающийся или

нет.Важно отметить, что этот эффект не связан с цитотоксическими явлениями, поскольку мы установили, что 50

м

мкг/мл митомицина С в течение 4 ч являются минимальным условием, позволяющим пролиферацию. арест клеток L4.5.

В заключение, хотя обработка

фидерных клеток митомицином С может быть эквивалентна

g

-облучению в некоторых

краткосрочных анализах, таких как MLR, его эффективность в индукции

размножения совместно культивируемых клеток-мишеней могут быть ограничены для

долгоживущих культур, особенно когда лиганды или цитокины

экспрессируемые фидерными клетками снижаются из-за нарушения метаболизма. Мы предлагаем частое обновление фидерных клеток

, когда лечение митомицином С является единственным доступным методом

. В любом случае, наши результаты убедительно свидетельствуют о том, что

g

-облучение более выгодно, чем обработка мито-

мицином С, когда фидерные клетки участвуют в подготовке большого количества трансплантируемых клеток человека. . Таким образом, эта работа предоставляет ценную информацию

об оптимизации размножения гемопоэтических клеток in vitro.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Авторы благодарят д-ра Сержа Котэ за полезное обсуждение и критическое прочтение рукописи и Жана-

Франсуа Леблана за внимательное прочтение и конструктивные

комментарии к рукописи.

ССЫЛКИ

1. Shih CC, D DiGiusto и SJ Forman. (2000).

Ex vivo

ex-

набор трансплантируемых гемопоэтических стволовых клеток человека:

где мы находимся в 2000 году? J Hematother Stem

Cell Res 9:621–628.

2. Садлен М., Ф. Фрассони и И. Ривьер. (2000). Вопросы при производстве

и трансплантации генетически модифицированных

гемопоэтических стволовых клеток. Curr Opin Hematol 7: 364–377.

3. Ханазоно Ю., К.Э. Браун и К.Э. Данбар. (2000). Первичные

Т-лимфоциты как мишени для генной терапии. J Hematother

Stem Cell Res 9:611–620.

4. Хагихара М., К.В. Ли, Б. Гансувд, Б. Мунхбат, Х. Иноуэ,

Ю. Шимакура, Т. Цучия, Ю. Уэда, М. Оки, К. Андо, С. Като

и Т. Хотта.(2001). Обширное и долгосрочное

ex vivo

производство дендритных клеток из CD34-положительных клеток пуповинной крови

клеток костного мозга или пуповинной крови с помощью новой системы культивирования

с использованием стромы мыши. Дж. Иммунол. Методы 253:45–55.

5. Баншеро Ж. и Ф. Руссе. (1991). Выращивание лимфоцитов человека B

в системе CD40. Природа 353: 678–679.

6. Гупта П., Б.Р. Блазар, К. Гупта и К.М. Верфейли. (1998).

CD34(1) клетки костного мозга человека регулируют стромальную продукцию интерлейкина-6 и гранулоцитарного

колониестимулирующего фактора и повышают колониестимулирующую активность

стромы.Кровь 91: 3724–3733.

7. Коллер М.Р., И. Манчел и Б.О. Палссон. (1997). Значение соотношения паренхиматозных и стромальных клеток для реконструкции кроветворения человека ex vivo. Стволовые клетки 15:305–313.

8. Zandstra PW, DA Lauffenburger и CJ Eaves. (2000). Модель порога передачи сигналов лиганд-рецептор

контроля дифференцировки стволовых клеток: биологически законсервированный механизм

, применимый к гемопоэзу. Кровь 96: 1215–1222.

9. Дойл А., Дж. Б. Гриффитс и Д. Г. Ньюэлл, ред.

Клетки и ткани

Культура: лабораторные процедуры

. (1996). John Wiley

& Sons, Солсбери, Великобритания.

10. Малиновский К., Пуллис С., Райсбек А.П. и Рапапорт Ф.Т.

(1992). Модуляция экспрессии маркера лимфоцитов человека

с помощью гамма-облучения и митомицина C. Cell Immunol

143:368–377.

11. Андерсон Р.Э., Л. Пог, Г. М. Труп и Дж. К. Стандефер.

(1984). Сравнение облучения и митомицина как

блокаторов в смешанной лимфоцитарной реакции. Arch

Pathol Lab Med 108:363–367.

12. Шрадер Т.Дж. (1999). Сравнение фидерных клеток HepG2

, полученных под воздействием гамма-лучей, рентгеновских лучей, УФ-С света

или митомицина С на способность активировать 7,12-диметил-

бенз[а]антрацен в клеточно-опосредованном Китайский хомяк

Анализ мутации V79/HGPRT.Мутат Рез 423: 137–148.

13. Уэбб С.Р., Дж.Х. Ли, Д.Б. Уилсон и Дж. Спрент. (1985). Ca-

Способность малых популяций, обогащенных В-клетками, стимулировать

смешанные реакции лимфоцитов: заметные различия между

облученными стимуляторами и стимуляторами, обработанными митомицином С. Eur J Im-

мунол 15:92–96.

14. Dubois B, B Vanbervliet, J Fayette, C Massacrier, C Van

Kooten, F Brière, J Banchereau и C Caux. (1997). Зубчатые клетки усиливают рост и дифференцировку CD40-активированных В-лимфоцитов.J Exp Med 185: 941–951.

15. Foy TM, A Aruffo, J Bajorath, JE Buhlmann и RJ Noelle.

(1996). Иммунная регуляция с помощью CD40 и его лиганда GP39.

Annu Rev Immunol 14:591–617.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ УГ-ОБЛУЧЕНИЯ И МИТОМИЦИННОЙ ЛЕЧЕНИЯ

879

Таинственные гамма-лучи, прослеживаемые до галактик, питаемых черными дырами с питающей сверхмассивной черной дырой в их центре, которая выпускает струи энергии к Земле.

Исследование, опубликованное в журнале The Astronomical Journal, , направлено на решение одной из наиболее важных задач в астрономии высокоэнергетического гамма-излучения; поиск низкоэнергетических аналогов неопознанных источников гамма-излучения.

Эти неопознанные источники составляют около трети объектов, обнаруженных к настоящему времени космическим гамма-телескопом Ферми (Ферми), который был запущен в 2008 году и наблюдает за небом в высокоэнергетическом излучении с низкой околоземной орбиты.

Блазар возникает, когда газ вокруг сверхмассивной черной дыры в центре активной галактики, известной как активное галактическое ядро ​​(АЯГ), захватывается гравитационным влиянием этого объекта, масса которого может достигать миллиардов раз больше, чем у солнца.

Этот газ образует аккреционный диск вокруг черной дыры по мере того, как он постепенно “подпитывается” к массивному центральному объекту. Прежде чем газ пересечет горизонт событий черной дыры, точку, из которой не может выйти даже свет, он генерирует столько электромагнитного излучения, что AGN часто ярче, чем совокупное излучение всех звезд в галактике, в которой он находится.

Блазар возникает, когда эта высокоэнергетическая струя, включающая в себя вещество, летящее по космосу со скоростью 99% скорости света, наклонена таким образом, что направлена ​​прямо на Землю.

«Слово блазар — это всего лишь ярлык для активной галактики, где джет указывает на Землю», — сказал профессор физики Университета Висконсин-Мэдисон Фрэнсис Халзен. «Это, конечно, означает, что мы сидим прямо в луче частиц, извергаемых на нас черной дырой».

Наиболее распространенным источником гамма-излучения были идентифицированы блазары, и это натолкнуло астрономов на мысль, что неопознанные источники гамма-излучения также могут исходить от этих активных галактик, в центре которых находится сверхмассивная черная дыра, жадно поглощающая материал.

Проблема в том, что для полного понимания этой связи и раскрытия природы этих неопознанных источников гамма-излучения астрономам приходится смотреть на кандидатов в видимом свете.

Для этого группа исследователей во главе с ученым доктором Гарольдом Пенья Херасо из Национального института астрофизики Мексики обратилась к оптическому и электронному (INAOE) многообъектному спектроскопическому телескопу Fabre Large Sky Area (LAMOST) в Станция Xinglong в Китае, которая с 2011 года ведет наблюдения за Млечным Путем в видимом и инфракрасном свете.

Команда выбрала несколько блазароподобных источников гамма-излучения, обнаруженных Ферми, известных как Блазар-кандидаты неопределенного типа (BCU), и провела поиск в данных, собранных LAMOST. Это позволило им подтвердить, что многие из этих BCU действительно являются блазарами.

«Данные LAMOST также позволили проверить природу сотен дополнительных блазаров путем поиска линий излучения или поглощения, используемых для определения их космологических расстояний», — сказал профессор Шанхайской астрономической обсерватории Китайской академии наук Минфэн Гу в пресс-релизе института.

Однако обнаружение многих из этих блазаров и точное определение их расстояния от Земли может оказаться сложной задачей. Астрономы обычно используют особенности спектра космического объекта для измерения расстояния. Большинство этих недавно идентифицированных блазаров относятся к BL Lacertae, типу активного галактического ядра с невыразительным оптическим спектром.

Безликий спектр недавно идентифицированного блазара затрудняет его точное определение. К счастью, не все блазары новостей не имели подписи в своих спектрах.Гарольд А. Пенья Херасо/ESO

К счастью, данные LAMOST показывают, что некоторые из этих недавно идентифицированных блазаров действительно имеют видимые признаки в оптическом спектре. Эти особенности могут быть ключевыми для использования наблюдений LAMOST для измерения расстояний до этих блазаров

Поскольку АЯГ, похоже, влияют на развитие галактик, в которых они находятся, изучение блазаров может стать важным шагом на пути к пониманию эволюции Вселенной.

«Я начал работать над этой оптической кампанией и анализировать спектроскопические данные в 2015 году, и в настоящее время, благодаря наблюдениям, доступным в архиве LAMOST, мы, безусловно, сделали значительный шаг к отождествлению источников гамма-излучения с блазарами», Болонский университет и Исследователь INAF-OAS Dr.— сказала Федерика Риччи. «Перспективы будущего, достижимые благодаря наборам данных LAMOST, окончательно раскроют природу сотен новых блазаров в ближайшие годы».

Иллюстрация активной галактики, выбрасывающей высокоэнергетическую струю. Астрономы обнаружили, что необъяснимыми источниками гамма-излучения могут быть эти «блазарные» галактики.
М. Корнмессер/ESO

Повышенная эффективность фидерных клеток, обработанных гамма-излучением, по сравнению с обработанными митомицином С для размножения нормальных клеток человека в долгосрочных культурах Клеточная иммунология.

К. Малиновский Ф. Т. Рапапорт

17 октября 1991 г.. Природа. Дж. Баншеро, Ф. Руссе

12 мая 1989. Sprent

1 января 1994 г. · Ежегодный обзор иммунологии · J BanchereauS Saeland

17 июля 1995 г. · Journal of Immunological Methods · I VermesC Reutelingsperger

1 августа 1993 г. · Journal of Cellular Physiology · J Perreault, R 0002 90 Lemieux 90 003ux 90 1 января 1996 г. · Иммунологические исследования · S NéronA Darveau

1 января 1996 г. · Ежегодный обзор иммунологии · TM FoyR J Noelle

3 марта 1997 г. · Журнал экспериментальной медицины · B DuboisC Caux

января 1, 1997·Стволовые клетки·MR KollerB O Palsson

2 февраля 1999·Experimental Cell Research·C GuilloufF Rosselli

25 февраля 1999·Mutation Research·TJ Schrader

31 октября 2000·Current Opinion in Hematology SadelainI Rivière

25 ноября 2000 г.·Journal of Hematotherapy & Stem Cell Research·Y HanazonoC E Dunbar

25 ноября 2000 г.·Journal of Hematotherapy & Stem Cell Research·CC ShihS J Forman

1 июня 2001 г. ·Journal of Immunological Методы · M HagiharaT Hotta

24 июля 2001 г. · Иммунологические исследования · D JungM Richard

Цитаты

1 января 2009 г. · In Vitro Cellular & Development Biology.Животное · J G XingN C Bols

16 июня 2009 г. · Клонирование и стволовые клетки · Гезине Флейшманн Питер А. Часть C, Методы · Xin FuTong Cao

7 сентября 2012 г. · Мутагенез · Майк О’Донован

7 марта 2007 г. · Инфекция и иммунитет · Jyotsna ChandraMahmoud A Ghannoum

8 декабря 2004 г. · Репродукция: Официальный журнал Общество изучения фертильности · Jung Bok LeeHyun Soo Yoon

30 октября 2009 г. · Archivum Immunologiae Et Therapiae Experimentalis · Sonia NéronAnnie Jacques

6 декабря 2014 г. · Journal of Biological Engineering · Elise CachatJamie A Davies

1

Feb

· Клиническая иммунология: официальный журнал Общества клинической иммунологии · Доминик Пакен Пру, Рене Базен

, 21 июля 2009 г. · Экспериментальные исследования клеток · Ульрих М. Бехер, Бернд К. Флейшманн,

, 26 мая 2009 г. · Письма по иммунологии · Доминик Пакен Пру, Рене Базен, 9009, 903 24, 2015 · Бернс: Журнал Международного общества ожоговых травм · Риши Ман Чу Лакшмана Кумар Йернени

30 ноября 2005 г. · Иммунология · Соня Нерон Матье Герен

15 ноября 2011 г. ·Журнал тканевой инженерии и регенеративной медицины·Hirotoshi MiyoshiChiaki Sato

3 июня 2010 г.·Biotechnology Journal·Lauren M BrowningXiao-Hong Nancy Xu

18 января 2014 г.·Methods: a Companion to Methods in Enzymology·Lucy Cherbas, Lei Gong

7 февраля 2015 г. · Тканевая инженерия.Часть B, Reviews · Sara Llamesmarcela del Río

июля 2011 г. · Журнал иммунологических методов · Соня Néronnathalie Dussault

3, 2014 · Экспериментальная гематология · Хиротоши Мьёшичаки Sato

января 19, 2015 · Китотехнология · Гуанминг Цзянбаолонг Ван

мая 2016 г. · Журнал фармакологических и токсикологических методов · Rishi Man Chughlakshmana Kumar yerneni

марта 25 марта 2016 · Биотехнология прогресс · Кенни ЗамбраноровойОльфgang Schuh

января 23, 2017 · Цитотехнология · Rishi Man Chughlakmana Kumar yerneni

сентября 18 2018 г. · Международный журнал гипертермии: официальный журнал Европейского общества гипертермической онкологии, Североамериканская группа гипертермии · Кен Андо Такаши Накано

13 февраля 2019 г. · Международный журнал искусственных органов · Хиротоши Миёси Миса Морита

16 января 2020 г. · BioTechniques ·Fatima M AlmenarioAhmad Rf Mazahery

9 сентября 2020 г.·Cytotechnology·Hirotoshi MiyoshiSatoshi Sugiyama 9000 3

12 сентября 2008 г. · Текущие протоколы в биологии стволовых клеток · Анна Э. Михальска

1 марта 2013 г. · Клеточная медицина · Джейми Э. Дикерсон, Герберт Б. Слэйд

22 октября 2003 г. · Журнал иммунологии: Официальный журнал Американской ассоциации of Immunologist·Jessie F Fecteau, Sonia Néron

23 ноября 2016·Journal of Immunology Research·Guillaume BonnaureSonia Néron

14 февраля 2021·Stem Cell Research & Therapy·Ryo YokomizoAkihiro Umezawa

218 May·20 Scientific Reports·20 Делия Альба СотоПабло Хуан Росс

5 вещей, которые вы не знали о Feeding America – Alpha Gamma Delta

Fighting Hunger, Foundation, Philanthropy

В рамках нашей благотворительной акции по борьбе с голодом Alpha Gam активно участвует в Месяце борьбы с голодом. Каждый сентябрь люди и продовольственные банки по всей стране объединяются с Feeding America, чтобы распространять информацию и действовать, чтобы покончить с голодом. Вот пять фактов о Feeding America, чтобы лучше познакомить вас с одним из двух наших основных партнеров-филантропов.

1. Продовольственные банки Feeding America распределяют в среднем более восьми миллионов фунтов свежих продуктов каждую неделю.
  • Склады не только предоставляют консервы и продукты длительного хранения, но и свежие продукты являются важным компонентом, предоставляя здоровые варианты тем, кто не может себе это позволить.
2. Сеть Feeding America состоит из 200 продовольственных банков, которые поддерживают 60 000 продовольственных кладовых и программы питания.
  • Хотя продовольственные банки и кладовые предоставляют еду, они делают это по-разному. Продовольственные банки — это большие склады, поставляющие продукты в кладовые. Они получают поддоны с едой и разбивают их на меньшие количества для распределения по нескольким кладовым. Продовольственные кладовые — это небольшие местные организации, которые предоставляют услуги и еду непосредственно членам сообщества.
3. Продовольственные банки Feeding America получают гранты от фонда Alpha Gamma Delta Foundation.
  • Делая пожертвования в Фонд, вы также помогаете влиять на мир через гранты на борьбу с голодом. Местным организациям по оказанию помощи голодающим предлагается подать заявку на получение гранта от Фонда. Щелкните здесь, чтобы просмотреть список получателей гранта на борьбу с голодом на 2017–2018 гг.
4. Feeding America учит людей делать более здоровый выбор.
  • Отсутствие продовольственной безопасности напрямую связано с общим состоянием здоровья. Узнайте больше здесь.Feeding America предлагает программы по улучшению выбора продуктов питания, чтобы помочь нуждающимся.
5. Feeding America играет большую роль в спасении продуктов питания и сокращении отходов.
  • Большая часть свежих продуктов, распространяемых Feeding America, поставляется фермерами и компаниями, которые собирались их выбросить. Жизнеспособные продукты питания часто расточительно выбрасываются по разным причинам. Клиенты часто отказываются от заказанных блюд, потому что они не соответствуют размеру заказанного ими блюда, они внесли изменения в свое меню или из-за проблем с транспортировкой, например, из-за повреждения внешней упаковки.Поощряя фермеров и компании жертвовать эту еду, а не выбрасывать ее, Feeding America спасла 2,8 миллиарда фунтов еды в 2016 году.

Влияние Feeding America широко распространено. Что вы можете сделать в этом году, чтобы оказать влияние?

 

Похожие сообщения:

FHC: ИНИЦИАТИВА ПОЛНЫХ ДОМА, ОБСЛУЖИВАЮЩИХ ПОЛНЫЕ ПЛАСТИНЫ

 

 

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.